Questões sobre Bioquímica

A técnica de “Western-Blot” é caracterizada pela transferência de proteínas para a superfície de uma membrana. Identifique o item a seguir que melhor representa essa técnica.

• A. No caso da eritropoietina e análogos farmacológicos, a dupla transferência aumenta a especificidade da técnica.
• B. O passo de incubação com o anticorpo secundário é necessário para o reconhecimento da proteína de interesse.
• C. O sinal detectado pelo complexo proteína-anticorpo primário é indiretamente proporcional à quantidade de proteína na amostra.
• D. A técnica permite a purificação de proteínas de amostras complexas.
• E. O passo de bloqueio da membrana é extremamente útil e aumenta as interações inespecíficas.

Uma amostra que contém quatro proteínas (pontos isoelétricos das proteínas são: A = 9.2; B = 6.4; C = 7.0; D = 5.4) diluídas em um tampão com pH 6,4 será submetida a campo elétrico. Sobre o comportamento migratório dessas proteínas, é correto afirmar que:

• A. A e C migrarão para o polo positivo, B não migrará e D migrará para o polo negativo.
• B. A e B migrarão para o polo negativo, e C e D, para o polo positivo.
• C. A e B migrarão para o polo positivo e C e D migrarão para o polo negativo.
• D. A e C migrarão para o polo negativo, B não migrará e D migrará para o polo positivo.
• E. Todas as proteínas migrarão para o polo positivo, pois no pH de 6,4 elas terão carga global negativa.

Com relação a sua estrutura, podemos dizer que os diferentes anticorpos:

• A. apresentam uma estrutura geral semelhante, sem regiões variáveis distintas.
• B. apresentam, diversas regiões variáveis distintas na mesma estrutura.
• C. não apresentam regiões variáveis ao longo da estrutura.
• D. possuem, ao longo da cadeia peptídica, regiões variáveis iguais.
• E. apresentam estrutura geral semelhante e diferenças na região variável, que são reconhecidas por diferentes antígenos.

Com relação ao preparo da amostra e aos métodos que permitem a concentração de eritropoietina e seus análogos, podemos dizer que, para os procedimentos confirmatórios:

• A. o SDS-PAGE é mandatório para o procedimento confirmatório.
• B. a imunopurificação é mandatória para o procedimento de triagem inicial.
• C. a imunopurificação e ultrafiltração são opcionais.
• D. a imunopurificação das amostra é necessária antes da utilização da focalização isoelétrica.
• E. a imunopurificação deve ser utilizada em conjunto com a ultrafiltração depois da focalização isoelétrica.

Para a identificação de formas recombinantes de eritropoietina em urina, o gel SARCOSYL- -PAGE pode ser utilizado como método de triagem e confirmatório para CERA, porque:

• A. permite a identificação de bandas de baixo peso molecular.
• B. reage com a MIRCERA emitindo fluorescência mais intensa.
• C. o reagente lauroil sarcosyl precipita a CERA na urina.
• D. o SDS é mais tóxico.
• E. apresenta maior sensibilidade de detecção devido à utilização do reagente Lauroil Sarcosinato de Sódio em substituição ao SDS.

Dentre as alternativas adiante, assinale aquela que apresenta critérios que configuram resultado analítico adverso para a presença das formas recombinantes de Eritropoetina analisadas em SDS-PAGE ou SARCOSYL-PAGE.

• A. A identificação de uma única banda; uma banda difusa e duas ou mais bandas.
• B. Uma banda única no SDS-PAGE mais 2 bandas no SARCOSYL-PAGE.
• C. 3 bandas no SARCOSYL-PAGE.
• D. Nenhuma banda.
• E. Uma banda difusa no controle negativo.

Para a detecção de proteínas específicas utilizando a técnica de immunobloting podemos utilizar:

• A. somente enzimas ligadas a anticorpos e quimioluminescência.
• B. proteína A marcada radioativamente, enzimas ligadas a anticorpos secundários, ouro ligado a anticorpos secundários, sistema avidina biotina e quimioluminescência.
• C. quimioluminescência e o sistema avidina biotina e câmera CCD.
• D. anticorpos secundários ligados a ouro, proteína A marcada radioativamente e câmera CCD.
• E. quimioluminescência e câmera CCD.

Para a análise do passaporte biológico do atleta, os valores necessários para confirmar a precisão do instrumento utilizado são:

• A. coeficiente de variação acima de 1.5%, para hemoglobina e HCT, e coeficiente de variação abaixo de 15%, para porcentagem de reticulócito.
• B. coeficiente de variação abaixo de 15%, para porcentagem de reticulócito.
• C. coeficiente de variação abaixo de 0.5%, para hemoglobina.
• D. coeficiente de variação abaixo de 1.5%, para hemoglobina e HCT, e coeficiente de variação abaixo de 15%, para porcentagem de reticulócito.
• E. valores acima de 2.0%, para hemoglobina, e coeficiente de variação abaixo de 1%, para porcentagem de reticulócito.

As duas estratégias principais que têm sido estudadas e utilizadas na detecção do uso abusivo do hormônio do crescimento são:

• A. detecção do hormônio do crescimento por duplo blotting e focalização isoelétrica.
• B. detecção de diferentes isoformas do hormônio do crescimento hipofisário e quantificação do hormônio do crescimento e de proteínas dependentes.
• C. detecção de uma única isoforma de alto peso e imunobloting.
• D. imunopurificação e espectrometria de massas.
• E. identificação de proteínas dependentes e uma única isoforma.

Seguindo os critérios que regem laboratórios credenciados pela WADA (World Anti-Doping- -Agency), uma amostra de sangue deve ser analisada para obtenção do “Passaporte Biológico do Atleta”

• A. em no máximo 24 horas após a coleta.
• B. até 72 horas após a coleta.
• C. dentro de 36 horas após a coleta.
• D. imediatamente após a coleta.
• E. dentro de 48 horas após a coleta.