Questões de Biologia do ano 2014

A técnica utilizada na separação e purificação de proteínas é:

• A. Espectrofotometria.
• B. Ressonância Nuclear Magnética.
• C. Difração por Raio-X.
• D. Eletroforese.
• E. Western-Blot.

Sobre a análise da eritropoietina e análogos em urina, por focalização isoelétrica, é correto afirmar que ela consiste:

• A. numa purificação por cromatografia de afinidade, focalização isoelétrica, Western-Blot e revelação colorimétrica.
• B. numa cromatofocalização, dupla imunotransferência e revelação colorimétrica.
• C. nas etapas de pré-concentração da amostra, focalização isoelétrica, dupla imunotransferência e quimioluminescência.
• D. em uma focalização isoelétrica, onde diferentes eritropoietinas são separadas por volume molecular, Western-Blot e quimioluminescência.
• E. numa ultrafiltração, focalização isoelétrica, Western-Blot e revelação colorimétrica.

A eritropoietina (EPO) é um hormônio, cuja função principal é regular a produção de eritrócitos. Em relação a este hormônio, podemos afirmar que:

• A. eritropoietina é uma proteína ligada a lipídeo (lipoproteína).
• B. eritropoietina é um hormônio produzido principalmente pelo fígado, que promove a formação de eritrócitos no sangue.
• C. as células que sintetizam a eritropoietina são sensíveis aos baixos níveis de oxigênio no sangue.
• D. as formas recombinantes de eritropoietina têm peso molecular idêntico à endógena.
• E. cerca de 10% da eritropoietina endógena é produzida pelo rim.

Métodos de imunopurificação são comumente usados como técnicas de separação e purificação de proteínas. Sobre eles, é correto afirmar que:

• A. não dependem da especificidade do ligante.
• B. baseiam-se na afinidade da proteína com um ligante específico.
• C. a ligação entre a proteína e o ligante deve ser irreversível.
• D. são usados na purificação da eritropoietina (EPO) em urina, apesar da baixa recuperação de proteínas da EPO e da inespecificidade de suas diferentes isoformas.
• E. a carga e forma da proteína a ser isolada não interferem na imunopurificação.

A técnica de “Western-Blot” é caracterizada pela transferência de proteínas para a superfície de uma membrana. Identifique o item a seguir que melhor representa essa técnica.

• A. No caso da eritropoietina e análogos farmacológicos, a dupla transferência aumenta a especificidade da técnica.
• B. O passo de incubação com o anticorpo secundário é necessário para o reconhecimento da proteína de interesse.
• C. O sinal detectado pelo complexo proteína-anticorpo primário é indiretamente proporcional à quantidade de proteína na amostra.
• D. A técnica permite a purificação de proteínas de amostras complexas.
• E. O passo de bloqueio da membrana é extremamente útil e aumenta as interações inespecíficas.

Uma amostra que contém quatro proteínas (pontos isoelétricos das proteínas são: A = 9.2; B = 6.4; C = 7.0; D = 5.4) diluídas em um tampão com pH 6,4 será submetida a campo elétrico. Sobre o comportamento migratório dessas proteínas, é correto afirmar que:

• A. A e C migrarão para o polo positivo, B não migrará e D migrará para o polo negativo.
• B. A e B migrarão para o polo negativo, e C e D, para o polo positivo.
• C. A e B migrarão para o polo positivo e C e D migrarão para o polo negativo.
• D. A e C migrarão para o polo negativo, B não migrará e D migrará para o polo positivo.
• E. Todas as proteínas migrarão para o polo positivo, pois no pH de 6,4 elas terão carga global negativa.

Com relação a sua estrutura, podemos dizer que os diferentes anticorpos:

• A. apresentam uma estrutura geral semelhante, sem regiões variáveis distintas.
• B. apresentam, diversas regiões variáveis distintas na mesma estrutura.
• C. não apresentam regiões variáveis ao longo da estrutura.
• D. possuem, ao longo da cadeia peptídica, regiões variáveis iguais.
• E. apresentam estrutura geral semelhante e diferenças na região variável, que são reconhecidas por diferentes antígenos.

Com relação ao preparo da amostra e aos métodos que permitem a concentração de eritropoietina e seus análogos, podemos dizer que, para os procedimentos confirmatórios:

• A. o SDS-PAGE é mandatório para o procedimento confirmatório.
• B. a imunopurificação é mandatória para o procedimento de triagem inicial.
• C. a imunopurificação e ultrafiltração são opcionais.
• D. a imunopurificação das amostra é necessária antes da utilização da focalização isoelétrica.
• E. a imunopurificação deve ser utilizada em conjunto com a ultrafiltração depois da focalização isoelétrica.

Para a identificação de formas recombinantes de eritropoietina em urina, o gel SARCOSYL- -PAGE pode ser utilizado como método de triagem e confirmatório para CERA, porque:

• A. permite a identificação de bandas de baixo peso molecular.
• B. reage com a MIRCERA emitindo fluorescência mais intensa.
• C. o reagente lauroil sarcosyl precipita a CERA na urina.
• D. o SDS é mais tóxico.
• E. apresenta maior sensibilidade de detecção devido à utilização do reagente Lauroil Sarcosinato de Sódio em substituição ao SDS.

Dentre as alternativas adiante, assinale aquela que apresenta critérios que configuram resultado analítico adverso para a presença das formas recombinantes de Eritropoetina analisadas em SDS-PAGE ou SARCOSYL-PAGE.

• A. A identificação de uma única banda; uma banda difusa e duas ou mais bandas.
• B. Uma banda única no SDS-PAGE mais 2 bandas no SARCOSYL-PAGE.
• C. 3 bandas no SARCOSYL-PAGE.
• D. Nenhuma banda.
• E. Uma banda difusa no controle negativo.